氢化物一原子荧光光谱法测定岩藻聚糖硫酸酯中As，Hg含量

 岩藻聚糖硫酸酯(Fueoidan)是存在于褐藻细胞壁基质中的一种富含岩藻糖(L-fucose)和硫酸根的杂多糖。它在褐藻中的含量与褐藻的种类、产地、年龄等有关，有的可达到10％左右。大量研究表明，岩藻聚糖硫酸酯具有抗病毒、抗凝血、抗氧化、抑制肿瘤、降血压以及免疫调节]等多种生物活性。因此，岩藻聚糖硫酸酯是一种开发海洋保健品和药物的重要资源。

　然而，人们在从事工农业的活动中使环境污染加剧，及褐藻藻体对As，Hg等元素具有强的富集作用，最后导致多糖含有大量的As，Hg等元素，且部分以结合态形式存在予多糖中。As，Hg的存在，严重限制了多糖在食品、药品领域中的应用。此外，如果As，Hg与多糖中的硫酸根结合，将大大降低多糖的生物活性。为了正确评价AS。Hg对岩藻聚糖硫酸酯的物化性质、生物活性的影响，准确检测其在该多糖中的含量是十分必要的。

　　氢化物一原子荧光光谱(HG-AFS)法具有灵敏、简便、快速等特点。本文采用高压微波消解、用HG剐陌准确测定了岩藻聚糖硫酸酯中AS，Hg的含量。
1　实验部分
1．1　实验仪器与试剂
 1．1．1 实验仪器
  AF-640原子荧光光谱仪：北京瑞利分析仪器公司；MDS-2003F微波消解制样系统仪：上海新仪微波化学科技有限公司。
 1．1．2　实验试剂
  100ug·mL_1汞单元素标准溶液(GBW(E)080126)：国家标准物质研究中心；100ug·mL_1砷单元素标准溶液(GBW(E)080117)：国家标准物质研究中心；实验所用试剂均为分析纯及以上级别，实验用水为TKA-Genpure超纯水系统制备的超纯水。

1．2　实验材料
　岩藻聚糖硫酸酯的提取：80目海带粉经80℃热水提取，0．1 tool·L-1 HCI沉淀褐藻胶，并分别以30％和60％乙醇(v/v)分级沉淀得到岩藻聚糖硫酸酯粗品。粗糖样品经95％乙醇洗涤、冷冻干燥后，待测。
1．3　实验方法
  1．3．1　样品消解
1．2　实验材料
 岩藻聚糖硫酸酯的提取[18]：80目海带粉经80℃热水提取，0．1 tool·L-1 HCI沉淀褐藻胶，并分别以30％和60％乙醇(v/v)分级沉淀得到岩藻聚糖硫酸酯粗品。粗糖样品经95％乙醇洗涤、冷冻干燥后，待测。
1．3　实验方法
 1．3．1　样品消解
　 按文献方法，称取0.7g糖样于四氟乙烯（PTFE)消解罐中，加入9mL浓硝酸，在100℃下预消解6h后，按以下参数进行微波消解工步设置：压力和时间分别为2 atm，3 rain；5 fltrfl，2 min；10 fltnl，2 mim 15 arm，6 rain。消解完毕后，冷却。取出PTFE罐，置于加热板上120℃赶酸至冒白烟。用于测As的消解液及样品空白皆加入5mL 5％硫脲(w/v)，并分别用8％HCI转移、定容到50 mL；用于测Hg的消解液及样品空白分别用10％HCI转移并定容到50mL。每个样品各平行3份。

1．3．2　标准曲线的制作

 As标准曲线，分别加入1 tLg·mL_1 As标液0，1．25，2．5，5．0，7．5 mL于25 mL容量瓶中(各相当于砷浓度0，0．05，0。1，0．2，0．3 gg·mL-1)，加入5 mL 8．o％盐酸(∞)和5 IIlL 5％硫脲(w／v)后，用水定容，摇匀测量。Hg标准曲线，分别加入1 gg·mL-1 Hg标液0．5，1．0，1．5，2．0，2．5 mL于25 mL容量瓶中(各相当于汞浓度2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 ng·mL-1)，用lo％盐酸(p)定容，摇匀测量。

2　结果与讨论
2．1仪器参数对荧光强度及测量稳定性的影响
 2．1．1原子化器温度
　 实验表明，原子化温度在25～400℃时，As的荧光强度随温度的升高而增加，说明温度升高提高了AsH。的传输效率。但温度过高会使AsHs在经过原子化器加热的石英管中时被部分分解，分解产物即便进入氩氢焰也不会被原子化，从而造成荧光信号减弱。实验发现，检测As和Hg选择原子化器温度为300℃可获得良好检测效果。
 2．1．2　灯电流
　 当灯电流<100 mA时，灯电流越高，分析元素的荧光强度也越高，但过高的灯电流会降低空心阴极灯的使用寿命，且测量重复性差。从图1可以看出，检测As和Hg分别使用70和40 mA的灯电流可得到很好的灵敏度和稳定性。

 2．1．3　负高压(PMT)

　　从图2可以看出，检测时增加负高压可明显提高荧光强度，但过高的负高压会使测定的重现性变差。检测As和Hg都采用240V的负高压可以获得良好的灵敏度和稳定性。

2．2　氢化发生条件对荧光强度及测量稳定性的影响
2．2．1　载流酸度
　 载流酸度直接影响着原子荧光的强度。以硼氢化钾一酸为还原体系，载流、硼氢化钾和采样液在氢化物发生器中混合，酸和硼氢化钾发生分解反应，产生大量的氢气并使As和Hg离子生成相应的氢化物。研究发现，以HCI为载流，其酸度在2％～14％范围内，As原子荧光强度随酸度增加而变大，并在8％时变化开始趋于平缓；而酸度对Hg原子荧光强度的影响不大。

2．2．2 KBH。浓度
 KBH。浓度过高，会产生过量的氢气，将检测离子的氢化物稀释，使荧光强度减弱。此外，KBH．的浓度还会影响Hg原子荧光的稳定性。实验表明，检测As和Hg分别选用10％，3％(w／v)的KBI-h可获得很好的灵敏度和稳定性。
2．2．3预还原刺
　 以硫脲为预还原剂，发现硫脲的浓度对As的原子荧光强度的影响并不明显。但在用于检测AS和Hg样品中添加5％硫脲(w／v)可以对其他金属离子产生掩蔽作用。
2．2．4氩气流量

 过低的氩气流量不能将足够的氢化物带到原子化器中，使荧光强度降低，影响检测的灵敏度和稳定性；流量过高，会稀释氢化物，也会导致检测灵敏性和稳定性变差。实验表明，检测As使用600mL·min叫的氩气流量，检测Hg使用400 mL·mkn-1的氩气流量和300 mL·IIlin-1的屏蔽气效果较好。
2．3+标准曲线及检出限
 As和Hg的浓度与其荧光强度的关系为：k=102．9+54．343c山，，．一0．999 9；fHg一一3 343．0+5 400．3c№，r=0．999 8。As，Hg浓度分别在0"--200，2．o～10．0弘g·L-1有良好的线性关系。对样品空白进行lO次检测，用三倍标准偏差法计算检出限，舡的检出限为0．173熘·kg_1；Hg检出
限为0.012 2ug·kg-1。

2．4精密度分析
　 对样品进行连续测定(咒=8)，算得As和Hg的相对标准偏差分别为1．09％，1．69％。
2．5样品及加标回收率测定
　 为了考察岩藻聚糖硫酸酯中结合态的As和Hg含量。将岩藻聚糖硫酸酯分为两份，其中一份经超滤脱盐除去游离态的As和Hg，另一份则未经超滤脱盐。样品和加标回收率测定结果如表1所示。

3 结论

 (1)通过对实验条件的优化，检出限、精密度、加标回收率分析均得到了良好的结果。

 (2)样品检测结果显示，脱盐前后岩藻聚糖硫酸酯中的As和Hg含量分别为2．78和0．12,5 mg-l，2．26和0.119 mg·kg-1，表明Ag和Hg主要是以结合态形式存在于岩藻聚糖硫酸酯中，用超滤的方法无法将其去除。